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PBS DEPC处理水 4%PFA 50×TAE Tris-HCl缓冲液 Gluta固定液
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15%尿素-PAGE制胶液(DNA，microRNA)非无菌

Top1323
2～8℃
6个月
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Top1323 500ml ¥600.00
中文名称 15%尿素-PAGE制胶液(DNA，microRNA)非无菌
产品介绍： 15%尿素-PAGE制胶液（DNA，microRNA）
货号：Top1323
规格：500mL
保存：2-8℃，有效期6个月。
产品简介：
  终浓度
尿素 7M
40% Acr/Bis Solution 15%
10×TBE 电泳液 1×
操作步骤(仅供参考)： 
1. 边摇晃溶液变加入TEMED 和10%过硫酸铵。
2. 再充分摇晃约30秒后迅速灌胶，然后插入样品梳，室温放置30-60分钟等待胶凝固。
3. 将凝胶板放置在电泳装置上后，在上下层分别加入适当量的1×TBE电泳缓冲液。如果不马上使用，需要用湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。 
4. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液，充分将每个加样孔中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。
5. 在上样前，预电泳20-30分钟以使多余的过硫酸铵跑出加样孔，同时还可以使凝胶的温度升高（到50℃左右），有利于RNA变性状态。 
6. 将miRNA样品与等体积的miRNAon混合，70℃保温2-3分钟后迅速放置在冰上冷却，快速离心半分钟，放冰上待用。miRNA Marker需要每个上样孔用5uL，一块胶最好在两侧各用一个孔上样miRNA Marker。 
7. 关电泳仪后开始上样。 
8. 重开电泳仪，对13cm×15cm的胶，以20-30mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止；对36cm×45cm 的胶，则以50-60mA的电流电泳，直到红色染料移动到凝胶边缘为止。 
9. 染色观察：将凝胶一面的玻璃板揭开，直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色，包括银染（固定、漂洗、显影和定影等步骤）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）。UV 下观察并拍照。 
10. miRNA回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后进行胶回收处理。 
11. Northern杂交：按上法用 EB 等染料染色后，UV下确定所需要的miRNA条带的位置，切胶后电转移到带正电的尼龙膜上，然后进行杂交处理。 
12. 放射自显影：如果miRNA样品电泳前经过同位素标记，则将凝胶一面的玻璃板揭开，用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来，然后包上保鲜膜，真空抽干，然后使胶跟X光片向对进行放射自显影。 
注意事项： 
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
 
注：Acr/Bis的终浓度需要根据待分离RNA长度选择（见下表）
6-100 nt 20%
25-150 nt 15%
40-200 nt 12%
60-400 nt 8%
80-500 nt 5%
1000-2000 nt 3.50%
 
 
 

博奥拓达源头厂家，规格齐全。从标准到特殊，博奥拓达定制服务，满足您的个性化需求！

注意：

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。 

备注:
以上数据均来自公开文献,博奥拓达暂未进行独立验证,仅供参考。
These protocols are for reference only. Biotopped does not independently validate these methods.

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