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单脱氢抗环血酸还原酶(MDHAR)检测试剂盒(分光光度法)

TOPEK190544
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TOPEK190544 50T/48S ¥890.00
中文名称 单脱氢抗环血酸还原酶(MDHAR)检测试剂盒(分光光度法)
产品介绍:

产品内容:

提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。试剂一:液体 40mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。试剂三:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加入 5mL 蒸馏水充分溶解。试剂四:粉剂×1 瓶,-20℃避光保存。临用前加 5mL 试剂一充分溶解。

产品说明:

MDHAR 催化 MDHA 还原生成 AsA,在抗坏血酸氧化还原代谢中具有重要作用。
MDHAR 催化 NADH 还原 MDHA 生成 AsA 和 NAD+,NADH 在 340 nm 有特征吸收峰,但是 NAD+没有。通过测定 340 nm 光吸收下降速率,来计算出 MDHAR 活性。

实验中所需仪器及设备:

研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL 石英比色皿、可调式移液枪和双蒸水。

操作步骤:

一、粗酶液提取:
  1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)1:5-10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL
提取液进行冰浴匀浆。10000rpm,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。
  1. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500-1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声超声破碎细胞(功率 300w,超声 3s,间隔 7s,总时间 3min);然后 10000rpm,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

二、MDHAR 测定操作:

  1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。
  2. 试剂一在 25℃水浴锅中预热 30 min。
  3. 依次在石英比色皿中加入下列试剂
试剂名称(μL) 试剂二 试剂三 试剂四 试剂一 蒸馏水 上清液
空白管  
100
 
100
 
100
 
600
100  
测定管   100
迅速混匀后于 340nm 比色,记录 30s 和 150s 的吸光值。分别记为 A1、A2,ΔA=A1-A2,得到
△A 测定、△A 空白。三、MDHAR 活性计算:

 

  1. 按蛋白浓度计算

MDHAR 活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化 1μmol NADH 为一个酶活单位。
MDHAR (U/mg prot) = [(△A 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总×106]÷(Cpr×V 样)÷T
=0.804×(△A 测定管-△A 空白管) ÷Cpr

  1. 按样本鲜重计算

MDHAR 活性单位定义:25℃中每克样品每分钟氧化 1μmol NADH 为 1 一个酶活单位。
MDHAR (U/g  鲜重) =[(△A 测定-△A 空白)÷(ε×d)×V 反总×106]÷(V 样÷V 样总×W)÷T
=0.804×(△A 测定管-△A 空白管) ÷W
(3)按细胞数量计算
MDHAR 活性单位定义:25℃中每 104 个细胞每分钟氧化 1μmol NADH 为 1 一个酶活单位。
MDHAR (U/104 cell) =[ (△A 测定管-△A 空白管)÷ε÷d×V 反总×106]÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T
=0.804×(△A 测定管-△A 空白管) ÷细胞数量
ε:NADH 摩尔消光系数,6220 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;106:1mol=1×106μmol;V 反总:反应体系总体积,1mL=0.001 L;V 样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1mL;V 样总: 提取液体积,1mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL,蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公司蛋白质含量 BCA 试剂盒;W :样品质量,g;细胞数量:以 104 为单位计量,万个;T:反应时间, 2min。
 

定制产品:

博奥拓达源头厂家,规格齐全。从标准到特殊,博奥拓达定制服务,满足您的个性化需求!

鉴于定制产品的规格与功能是根据客户特定需求定制,其操作与维护方式亦有独特性。因此,不提供通用说明书。

 

注意:

1.本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

2.为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。 

 

备注:
以上数据均来自公开文献,博奥拓达暂未进行独立验证,仅供参考。
These protocols are for reference only. Biotopped does not independently validate these methods.

暂无 质检报告(COA)!
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