使用萤火虫荧光素酶 (Fluc) 作为报告基因和 D-荧光素作为底物的生物发光成像 (BLI) 是目前应用最广泛的技术。将总信号强度与 D-荧光素注射后的时间作图，以生成时间-强度曲线。除了峰值信号外，D-荧光素注射后固定时间点 (5、10、15 和 20 分钟) 的信号被确定为峰值信号的替代信号。给定时间-强度曲线中的信号针对曲线中的峰值信号进行归一化，以表示 D-荧光素注射后的时间变化模式。
注入 10 μL每克体重的 D-萤光素 (腹膜内或静脉内) 储备液：标准 150 mg/kg 注射的 20 g 小鼠通常约 200 μL。
解冻 D-萤光素 (钾盐或钠盐) 室温并溶解在 dPBS (不含钙或镁) 中，最终浓度为 15 mg/mL。通过 5-10 mL 的无菌 H2O 润湿 0.22 μM 过滤器并丢弃水。通过准备好的 0.22 μM 注射器过滤器对 D-荧光素溶液进行消毒。
注射入体内 10-20 min (待光信号达到最强稳定平台期)，再进行成像分析。
注意：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。荧光素注射注入小鼠体内后，约 1 min 可扩散到小鼠全身。
对于腹腔注射来讲，扩散较慢，开始发光较慢，持续发光时间较长。
对于荧光素的尾部静脉注射，扩散快，开始发光快，但发光持续时间较短。 |
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