正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢 、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切 相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。
测定原理：
乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使 NAD+还原生成 NADH 和 H+，H+传递给 PMS 生成的 PMSH2 还原 INT 生成红色物质，在 530nm处有特征吸收峰。
组成：
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产品名称
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50T/24S
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Storage
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提取液：液体
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55ml
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4℃
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试剂一 ：液体
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5ml
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4℃
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试剂二：液体
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12ml
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4℃
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试剂三：粉剂
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1 支
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-20℃避光
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试剂四：粉剂
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1 瓶
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4℃避光
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试剂五：粉剂
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1 支
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4℃避光
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标准品：液体
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1ml
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4℃
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说明书
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一份
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试剂三：粉剂× 1 支，-20℃避光保存 。临用前加入 1.5ml 蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂× 1 瓶，4℃避光保存 。临用前加 15ml 蒸馏水充分溶解。
显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1（ml)：0.3（ml)： 3（ml)：15（mg）的比例充分混匀 。（注意：现配现用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，试剂盒中带有 5 个棕色空瓶）
自备仪器和用品：
天平 、研钵 、离心机 、可见分光光度计 、 1 ml 玻璃比色皿 、恒温水浴锅。
样本处理：
1.组织：按照质量（g） ：提取液体积(ml)为 1：5~ 10 的比例（建议称取约 0. 1g，加入 1ml 提取液）加入 提取液，冰浴匀浆后于 4℃, 12000g 离心 10min，取上清测定。
2.细胞：按照细胞数量（104 个） ：提取液体积（ml） 为 500~ 1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 提取液） ，冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；于 4℃, 12000g 离心 10min，取上清测定。
3.血清：直接测定。
测定操作：
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样品对照管
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样品测定管
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标准对照管
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标准测定管
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样品(μl）
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50
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50
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标准品(μl）
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50
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50
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H2O ( μl）
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300
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450
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300
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450
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试剂一 ( μl）
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150
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150
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试剂二 ( μl）
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200
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200
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200
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200
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显色液(μl）
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300
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300
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300
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300
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充分混匀，于 37℃反应 30min，于 1ml 玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定 530nm 处吸光值，分别记为 A1，A2，A3，A4，△A 样=A2-A1；△A 标 = A4-A3
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注意：标准对照管和标准测定管只需测定一次 ，每个样品测定管设一个样品对照管
计算公式：
1.按照蛋白含量计算
LA含量(μmol/mg prot）=△A 样÷△A 标×C 标÷ Cpr
=2 ×△A 样÷△A 标÷ Cpr
2.按照样本质量计算
LA 含量(μmol/g 鲜重）=△A 样÷ △A 标×C 标÷ W
=2 ×△A 样÷△A 标÷ W
3.按照细胞数量计算
LA 含量(μmol/104 cell）=△A 样÷△A 标×C 标÷ 细胞数量
=2 ×△A 样÷△A 标÷ 细胞数量
4.按照液体体积计算
LA 含量(μmol/ml）=△A 样÷ △A 标×C 标
=2 ×△A 样÷△A 标
C 标：标准品浓度，2mmol/L ；W：样本质量，g/ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml
注意事项：
1.若吸光值超过 2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
2.最低检出限为 1.8μmol/L。 |
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