透析袋简介与原理:
透析袋是由半透膜制成的袋装容器,主要用于在生物大分子的制备过程中除去盐、少量有机溶剂、生物小分子杂质等,其材质为再生纤维素(RC)。
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。
透析袋技术参数:
1、PH值稳定范围:5-9;
2、污染物水平:硫化物<0.3%,重金属<50ppm;
3、化学兼容性:与很多盐兼容,比如CaCl2,(NH4)2SO4,还可与分子生物学及酶学中常用的水溶剂、有机溶剂兼容,如异丙醇、乙醇和丙酮等;
4、温度抵抗性:可煮沸,可高压灭菌;
5、蛋白吸附:每克透析袋吸附蛋白量小于1ng。
透析袋使用前处理:
1、将透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段;
2、在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(PH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟;
(大体积2%(W/V)碳酸氢钠1mmol/L EDTA(pH 8.0)的溶液配制方法:先称去2.000g 碳酸氢钠于一洁净的小烧杯加适量的水初溶解,再加入称去的EDTA-2Na 292.248g(即1mol),最后转入到1L的容量瓶定容,摇匀即可,ph=8.0指的是混合液。)
3、用蒸馏水彻底清洗透析袋;
4、放在500ml的1mmol/L EDTA(PH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟;
5、冷却后,置于30%或者50%的酒精中,放于4℃冰箱,必须确保透析袋始终浸没在溶液内,从此时起,取用透析袋时必须带手套;
6、在使用前,要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗干净。
透析袋使用步骤:
1、把适量的透析液(缓冲液)加入透析装置,透析液的体积应为样品体积量的100倍;(例如,在1L透析液中透析10ml的样品)
2、裁剪适当长度的透析管,预留一段额外长度(约占总样品体积量的20%)作为头部空间;
3、把透析管插入打开的透析夹,在约超出透析夹3-5mm的位置再夹住,不要折叠透析袋;
4、由透析管开口端将样品装入,调整一下顶部空间的长度,夹紧透析夹;
5、检查透析袋没有漏液情况后,把透析样品放在合适的透析缓冲液中开始透析;
6、透析要根据具体的应用需求,通常情况下,允许过夜透析,在持续透析的过程中,至少要进行3次完全更换透析液,建议在透析后2-4小时,6-8小时和10-14小时更换透析液,在最后一次透析液的更换后,要至少继续进行2小时的透析;
注意:对于高浓度污染物,样品可能需要较长的时间透析,透析液需要更频繁的更换;
7、透析温度主要取决于样品,温度最高限制主要取决于膜的类型,纤维素透析袋可以承受的温度高达37℃,再生纤维素透析袋可以承受的温度高达60℃。
透析袋的规格选择:
透析膜可用动物膜和玻璃纸等,但用的最多的还是用纤维素(再生纤维素 RC、纤维素酯CE、PVDF等)制成的各种尺寸的透析管透析膜。截留分子量MwCO(即留在透析袋内的生物大分子的最小分子量,缩写为MwCO)大概有100、200、300、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、5000、6000、7000、8000、10000、12000、14000、20000、30000、35000、50000、70000、100000、200000、300000、500000、1000000等种类,单位为道尔顿(D)。商品透析袋制成管状,其扁平宽度为10mm、25mm、34mm、44mm、55mm、77mm不等。
具体规格容量对应表如下:
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名称编码
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材质规格
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每厘米样品容量
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透析袋MD10
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RC膜,宽度10mm,直径6mm
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0.28ml/cm
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透析袋MD25
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RC膜,宽度25mm,直径16mm
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2.01ml/cm
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透析袋MD34
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RC膜,宽度34mm,直径22mm
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3.8ml/cm
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透析袋MD44
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RC膜,宽度44mm,直径28mm
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6.16ml/cm
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透析袋MD55
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RC膜,宽度55mm,直径35mm
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9.63ml/cm
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透析袋MD77
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RC膜,宽度77mm,直径49mm
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18.86ml/cm
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保存方法:
未处理的干型透析袋可存放于10-29度,每次使用后将余下的膜放回袋子并密封好,以防干裂,保质期5年;处理过的膜,没用完的置于30%或者50%的酒精中,放于4℃冰箱,必须确保透析袋始终浸没在溶液内,保质期2年。
注意事项:
1、可以在透析容器中加入磁力搅拌子来提高透析效率;
2、为了您的安全与健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 |